中和實驗

您現在的位置:首頁 - 技術中心 - 實驗方法 - 中和實驗

抗體中和TNF-α誘導殺傷L929細胞

1、材料
L-929 細胞系(ATCC Cat# CCL-1)
培養基:RPMI1640+10%FBS。
檢測培養基:RPMI1640+2%FBS。
96孔板(平底)(Costar Cat.No.3595)
放線菌素D,500ug/ml 等分-80度凍存(避光)。
MTT溶液:(Sigma Cat. No. M5655)5mg/ml 儲液(PBS稀釋),室溫避光保存。
MTT裂解液:20%SDS或50%DMF。

2、儀器
吸管和移液器
恒濕培養箱
96孔微孔檢測分光光度計

3、持續時間
孵育時間48小時(見速查表)
測定樣品準備時間1小時

4、實驗步驟
(1) 使用檢測培養基制備L929懸液,調整細胞濃度為3.5×105/ml,每孔加100ul細胞懸液。37度 5%CO2 恒濕培養箱培養過夜。
(2) 另一塊稀釋板中每孔加50ul檢測培養基。
(3) 使用兩倍的連續稀釋液從第3排到第12排依次稀釋功能級別的抗細胞因子抗體(見速查表標準范圍),留1,2排不加。
(4) 2排到12排每孔加50ul重組細胞因子和樣品(濃度見速查表,第二排是細胞因子和指示細胞組),1排是只有細胞的對照組。
(5) 37度 5%CO2 恒濕培養箱培養2小時。
(6) 將50ul的抗原抗體混合液加到包含細胞的對應孔中。
(7) 用檢測培養基稀釋放射菌素D儲液為4ug/ml的工作液,每孔加50ul工作液。
(8) 37度 5%CO2 恒濕培養箱培養24小時。
(9) 每孔加10ul MTT溶液(5mg/ml),孵育4小時。
(10)每孔加50ul MTT 裂解液,孵育過夜。
(11)570-650nm 讀板。
(12)繪制標準曲線分析數據。

分享到:
返回
2020无码最新国产在线观看-无码国模国产在线观看-最新国模无码国产在线视频_福利