中和實驗

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抗體中和細胞因子誘導細胞因子產生

1、材料
指示細胞系(見速查表針對給定的細胞因子)
培養基:RPMI1640+10%FBS。
96孔板(平底)(Costar Cat.No.3595)
細胞因子ELISA配對或ready-set-go kit

2、儀器
吸管和移液器
恒濕培養箱
96孔微孔檢測分光光度計

3、持續時間
孵育時間24-48小時
測定樣品準備時間1小時

4、實驗步驟
(1)向96孔板每孔中加50ul培養基1640.
(2)使用兩倍的連續稀釋液從第3排到第12排依次稀釋功能級別的抗細胞因子抗體(見速查表標準范圍),留1,2排不加。
(3)2排到12排每孔加50ul重組細胞因子和樣品(濃度見速查表,第二排是細胞因子和指示細胞組,1排是只有細胞的對照組)。
(4)1640培養基洗指示細胞三次,重懸調整細胞濃度到2-3.5×105/ml(見速查表)。
(5)每孔加100ul細胞懸液。
(6)37度 5%CO2 恒濕培養箱培養24-48小時。
(7)收獲上清ELISA檢測細胞因子。
(8)繪制標準曲線分析數據。

細胞因子檢測速查指南表(human and mouse):

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