In Vivo Imaging

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納米晶體標記細胞及活體成像參考實驗方法

一 實驗材料
(1) 細胞及完全培養基
(2) 8 孔 BD Falcon Culture Slides (cat. 354118)
(3) Reactive eFluor® Nanocrystals - InGaP Composition
(4) 0.2 μm 注射式濾器或其他無菌濾器
(5) 1CC胰島素注射器29 X 1/2-gauge(靜脈注射用)
(6) 裸鼠等動物模型
(7) 熒光成像系統

二 實驗步驟
細胞傳代
(1) 從75cm2的培養瓶中傳代細胞至BD Falcon Culture Slides,每孔密度為2萬細胞(細胞密度隨著使用培養板不同而不同)。
(2) 37度,5%CO2培養箱中培養細胞24-48小時,使細胞鋪滿培養板。

標記
(1) 使用完全培養基稀釋納米晶體,使最終OD值介于0.1至0.025之間。由于不同細胞適用納米晶體的最佳濃度不同,建議滴定法預實驗確定最佳濃度。
(2) 如果需要,使用0.2微米注射式濾器過濾標記溶液。
(3) 取200微升標記溶液代替培養板中的培養基。
(4) 培養過夜至24小時。
(5) 除去標記液,使用2毫升PBS洗滌三次。離心棄上清。
(6) 使用熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡檢測熒光標記情況,然后進行下一步實驗。

活體成像
(1) 麻醉動物。
(2) 尾靜脈注射納米晶體(主動靶向作用注射0.4nmol;被動靶向作用注射6nmol)。
(3) 成像系統鏡成像分析。

三 參考文獻
1. Jaiswal, J.K., Simon, S.M. 2007. Optical monitoring of single cells using quantum dots. Methods Mol Biol. 374:93-104.
2. Gao, X., Chung, L.W., Nie, S. 2007. Quantum dots for in vivo molecular and cellular imaging. Methods Mol Biol. 374:135-45.

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